核酸检测是什么?---PCR检测
新冠病毒肆虐全球,镁芬生物公司的PCR产品在对新冠病毒的核酸检测起到了核心作用,可以帮助检验人员快速、准确的判断是否感染新冠病毒。
一、什么是核酸PCR检测?
在我国已批准的10个新冠病毒核酸检测试剂中,其中有8个都是荧光PCR法,剩下的检测方法分别是联合探针锚定聚合测序法和恒温扩增芯片法。
二、为什么必须PCR检测?
因为抗原测试结果并不准确,2020年的时候德国人做了一项研究,结果显示40%的阳性患者在接受抗原测试后的结果为阴性,这些“假阴性”有可能在暗中传播。在欧洲,因为抗原测试的分析结果比PCR核酸要快的多(20分钟内可有结果),所以很多国家早先都是大量的使用抗原测试的方法,但德国的这项研究结果使很多国家不得不改变了检测的方法。所以最终才决定了使用PCR检测方法。
三、核酸检测的方法有哪些?
1.荧光PCR法
PCR法指的是聚合酶链式反应,能将微量的DNA大幅增加,用于检测新冠病毒时,由于新冠病毒是RNA病毒,需要先将病毒RNA逆转录为DNA,再进行PCR检测。
荧光PCR检测的原理为,随着PCR的进行,反应产物不断累积,荧光信号强度也等比例增加。最后通过荧光强度变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线图。
这是目前新冠病毒核酸检测最常用的方法。
PCR耗材选择原则
1. 看材质
镁芬生物PCR系列皆是PP材质,因为 PCR/qPCR 耗材通常会与试剂或样品直接接触,而聚丙烯(PP)材质是生物学惰性材料,表面不易于粘附生物分子,且有着良好的化学耐性及温度耐受性(可以 121 ℃ 高压灭菌,也可以承受热循环过程中的温度变化)。
2. 看PCR 管/板体积
不同体积的 PCR 管/板,该如何挑选?
选择宗旨:依据具体的实验要求选用合适的产品。对于低到中通量的PCR/qPCR实验,PCR管是比较理想的选择。
镁芬生物PCR系列规格齐全,既有单管也有联管。单管提供了设置准确运行反应数量的灵活性。另外,反应体积更大时,可选择0.5 mL规格的单管。联管通常以8或12管形式,管盖分开或带有管盖。可兼容单通道和多通道移液器,适用于低通量和中通量实验。带有管盖的联管可独立打开和关闭样品管,以防止样品污染。
3. 看管壁厚度
镁芬生物PCR系列超薄管壁,管壁厚度会直接影响热传导率,极薄的壁厚可优化热传递减少循环时间。超薄壁塑料比标准版薄约50%,进一步减少了热障,从而带来更快,更稳健的反应。
4. 看颜色
镁芬生物PCR系列既有白色,也有透明的,也有多种规格,适配市面上常见的PCR仪
尽管塑料的颜色对DNA扩增没有影响,但 qPCR 更推荐选用优质的白色 PCR 耗材。由于 qPCR 需要实时定量检测荧光信号强度,更需要灵敏、精确的荧光信号传递。实验证明,与传统的透明 PCR 产品相比,白色 PCR 产品可最大程度地反射荧光信号,减少孔间信号交叉污染,可优化实时荧光定量 PCR 的结果。
2.联合探针锚定聚合测序法
这种检测主要是用专门的仪器检测测序载片上DNA纳米球携带的基因序列
这种检测的灵敏度高,不容易漏诊,但结果也容易受多种因素的影响而不准,包括:未及时检测样本:和荧光PCR法一样,如果没有规范保存和尽快检测,结果可能不准。检测场所的室温过高:这也会影响检测结果的准确性。不同的检测仪器、试剂盒也可能对结果造成影响。
3.恒温扩增芯片法
基因芯片检测是传统的病毒学诊断方法之一,检测原理是基于核酸之间的互补结合特性开发的一种检测方式,能够用于定性或定量测量存在于生物体内的核酸。和PCR相比,基因芯片准确率高,时间更短,但价格也更为昂贵、检测通量(单位时间内所能产生的数据量)相对更低。此次获批的这个恒温芯片,能对新冠病毒在内的6种呼吸道病毒进行检测。1.5小时内便可获得结果,和PCR相比,基因芯片准确率高,时间更短,但价格也更为昂贵、且检测通量(单位时间内所能产生的数据量)相对更低。
4.病毒抗体检测法
抗体检测是检测血清中由病毒进入人体后刺激人体产生的IgM或IgG抗体,IgM抗体出现较早,IgG抗体出现较晚。目前已获批的5个新冠病毒抗体检测试剂,分别采用的是胶体金法和磁微粒化学发光法。
5.胶体金法
胶体金法是用胶体金试纸进行检测,也就是目前常说的快速检测试纸。
这种试纸经过特殊标记,上面有孔,用于滴入受检者的血清样本。胶体金试纸上面有2条线,一条叫做检测线,另一条叫做质量控制线,如果两条线都显色,代表阳性;只有质控线显色,代表阴性;这两种情况之外都属于无效结果。
这种检查一般在10~15分钟左右,就可以得出检测结果。
这种检测方法很方便,出结果的速度也很快。但主要的不足在于,检测通量较低,有一定的误判率(主要是受抗体质量影响)。
而且,胶体金法检测的新冠病毒抗体是IgM抗体。IgM产生的时间要晚于病毒复制的时间,所以检测的时间窗口比核酸检测窄。
6.磁微粒化学发光法
化学发光法是一种高度敏感的免疫检测,凡具有抗原性的物质都可以用这种方法测定。磁微粒化学发光法是在化学发光检测的基础上,加用了磁性纳米粒子,使检测具有了更高的灵敏度和更快的检测速度。不过,磁微粒化学发光法选择性差,会对一个系列的化合物做出反应,而非特定的某一化合物,因此,准确性上相对不够好。而且,环境对检测的影响比较大,容易导致误差。