核酸检测是什么?---PCR检测

 

     

 

        新冠病毒肆虐全球,镁芬生物公司的PCR产品在对新冠病毒的核酸检测起到了核心作用,可以帮助检验人员快速、准确的判断是否感染新冠病毒。

 

      一、什么是核酸PCR检测?

 ‍      新冠病毒检测的方法有很多种,其中的原理和相关设备都有会有所不同。

在我国已批准的10个新冠病毒核酸检测试剂中,其中有8个都是荧光PCR法,剩下的检测方法分别是联合探针锚定聚合测序法和恒温扩增芯片法。

 

       二、为什么必须PCR检测?

      因为抗原测试结果并不准确,2020年的时候德国人做了一项研究,结果显示40%的阳性患者在接受抗原测试后的结果为阴性,这些“假阴性”有可能在暗中传播。在欧洲,因为抗原测试的分析结果比PCR核酸要快的多(20分钟内可有结果),所以很多国家早先都是大量的使用抗原测试的方法,但德国的这项研究结果使很多国家不得不改变了检测的方法。所以最终才决定了使用PCR检测方法。

 

       三、核酸检测的方法有哪些?

       1.荧光PCR法
       PCR法指的是聚合酶链式反应,能将微量的DNA大幅增加,用于检测新冠病毒时,由于新冠病毒是RNA病毒,需要先将病毒RNA逆转录为DNA,再进行PCR检测。
荧光PCR检测的原理为,随着PCR的进行,反应产物不断累积,荧光信号强度也等比例增加。最后通过荧光强度变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线图。
这是目前新冠病毒核酸检测最常用的方法。

      PCR耗材选择原则

      1. 看材质

      镁芬生物PCR系列皆是PP材质,因为 PCR/qPCR 耗材通常会与试剂或样品直接接触,而聚丙烯(PP)材质是生物学惰性材料,表面不易于粘附生物分子,且有着良好的化学耐性及温度耐受性(可以 121 ℃ 高压灭菌,也可以承受热循环过程中的温度变化)。

       2. 看PCR 管/板体积

      不同体积的 PCR 管/板,该如何挑选?

      选择宗旨:依据具体的实验要求选用合适的产品。对于低到中通量的PCR/qPCR实验,PCR管是比较理想的选择。

      镁芬生物PCR系列规格齐全既有单管也有联管单管提供了设置准确运行反应数量的灵活性。另外,反应体积更大时,可选择0.5 mL规格的单管。联管通常以8或12管形式,管盖分开或带有管盖。可兼容单通道和多通道移液器,适用于低通量和中通量实验。带有管盖的联管可独立打开和关闭样品管,以防止样品污染。

        3. 看管壁厚度

       镁芬生物PCR系列超薄管壁,管壁厚度会直接影响热传导率,极薄的壁厚可优化热传递减少循环时间。超薄壁塑料比标准版薄约50%,进一步减少了热障,从而带来更快,更稳健的反应。

       4. 看颜色

      镁芬生物PCR系列既有白色,也有透明的,也有多种规格,适配市面上常见的PCR仪

      尽管塑料的颜色对DNA扩增没有影响,但 qPCR 更推荐选用优质的白色 PCR 耗材。由于 qPCR 需要实时定量检测荧光信号强度,更需要灵敏、精确的荧光信号传递。实验证明,与传统的透明 PCR 产品相比,白色 PCR 产品可最大程度地反射荧光信号,减少孔间信号交叉污染,可优化实时荧光定量 PCR 的结果。

       2.联合探针锚定聚合测序法
       这种检测主要是用专门的仪器检测测序载片上DNA纳米球携带的基因序列
这种检测的灵敏度高,不容易漏诊,但结果也容易受多种因素的影响而不准,包括:未及时检测样本:和荧光PCR法一样,如果没有规范保存和尽快检测,结果可能不准。检测场所的室温过高:这也会影响检测结果的准确性。不同的检测仪器、试剂盒也可能对结果造成影响。

 

        3.恒温扩增芯片法
       基因芯片检测是传统的病毒学诊断方法之一,检测原理是基于核酸之间的互补结合特性开发的一种检测方式,能够用于定性或定量测量存在于生物体内的核酸。和PCR相比,基因芯片准确率高,时间更短,但价格也更为昂贵、检测通量(单位时间内所能产生的数据量)相对更低。此次获批的这个恒温芯片,能对新冠病毒在内的6种呼吸道病毒进行检测。1.5小时内便可获得结果,和PCR相比,基因芯片准确率高,时间更短,但价格也更为昂贵、且检测通量(单位时间内所能产生的数据量)相对更低。

 

       4.病毒抗体检测法
       抗体检测是检测血清中由病毒进入人体后刺激人体产生的IgM或IgG抗体,IgM抗体出现较早,IgG抗体出现较晚。目前已获批的5个新冠病毒抗体检测试剂,分别采用的是胶体金法和磁微粒化学发光法。

 

       5.胶体金法
       胶体金法是用胶体金试纸进行检测,也就是目前常说的快速检测试纸。
这种试纸经过特殊标记,上面有孔,用于滴入受检者的血清样本。胶体金试纸上面有2条线,一条叫做检测线,另一条叫做质量控制线,如果两条线都显色,代表阳性;只有质控线显色,代表阴性;这两种情况之外都属于无效结果。

       这种检查一般在10~15分钟左右,就可以得出检测结果。

       这种检测方法很方便,出结果的速度也很快。但主要的不足在于,检测通量较低,有一定的误判率(主要是受抗体质量影响)。

而且,胶体金法检测的新冠病毒抗体是IgM抗体。IgM产生的时间要晚于病毒复制的时间,所以检测的时间窗口比核酸检测窄。

 

       6.磁微粒化学发光法
       化学发光法是一种高度敏感的免疫检测,凡具有抗原性的物质都可以用这种方法测定。磁微粒化学发光法是在化学发光检测的基础上,加用了磁性纳米粒子,使检测具有了更高的灵敏度和更快的检测速度。不过,磁微粒化学发光法选择性差,会对一个系列的化合物做出反应,而非特定的某一化合物,因此,准确性上相对不够好。而且,环境对检测的影响比较大,容易导致误差。

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